一、實驗?zāi)康模?
奶制品中己烯雌酚本研究利用固相萃取法作為樣品的前處理方法，HPLC法作為檢測手段。該方法可簡化樣品的前處理過程，節(jié)省有機(jī)溶劑的使用，操作簡便。
二、實驗?zāi)繕?biāo)物：
己烯雌酚CAS：56-53-1。
三、應(yīng)用范圍
本方法適用于奶制品中己烯雌酚HPLC檢測及確證。
四、參考標(biāo)準(zhǔn)
《GB/T 22992-2008 牛奶和奶粉中玉米赤霉醇、玉米赤霉酮、己烯雌酚、己烷雌酚、雙烯雌酚殘留量的測定
液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》。
五：實驗材料
SimplyGreen MAX固相萃取柱60mg/3mL。(貨號：SG02-06003)
六、實驗方法
1：樣品提取
取5 mL樣品，置于離心管中，加入10 mL乙腈，渦旋混合3 min，3500 r/min，取上清液于離心管中，再向樣品中加入5 mL乙腈，同前操作，合并提取液，50 ℃下氮吹至體積小于0.1 mL加水10 mL用5 mol/L NaOH 調(diào)節(jié)pH至11.04 ℃9000 r/min離心5 min，備用
2、SPE柱凈化
(1)活化：加入2 mL甲醇、2 mL水活化，流速為4
mL/min。
(2)上樣和洗脫：將樣品上清液上柱，流速為1
mL/min，依次用1 mL 氨水-水（1:19v/v）0.5 mL甲醇以3 mL /min的流速淋洗，通入20 mL空氣以4 mL/min的速度吹過SPE柱，用4 mL甲酸-甲醇（1:19v/v）洗脫，流速為 1 mL/min, 加入30 mL空氣以6 mL/min的速度吹過SPE柱，收集洗脫液。
(3)重新溶解：洗脫液在氮吹儀上于40 ℃水浴中吹干，加入1 mL流動相，渦旋30 s溶解。過0.2 μm濾膜后，用于HPLC測定。
3、HPLC條件
設(shè)備：Waters Alliance 2690
檢測器：Waters 2487 雙波長檢測器；
檢測波長：245 nm
色譜柱：Welch Ultimate XB-C18 (4.6X250mm)
流動相：等度洗脫，0.1%甲酸水/甲醇=30/70
流速：1 mL/min
進(jìn)樣體積：20 μL
柱溫：室溫
七、實驗結(jié)果
1、牛奶基質(zhì)加標(biāo)回收結(jié)果：
表1 牛奶中0.2mg/kg加標(biāo)回收實驗結(jié)果
|
名稱
|
回收率（%）
|
平均回收率
|
RSD
|
|
1
|
2
|
3
|
|
己烯雌酚
|
90.7
|
89.6
|
91.2
|
90.5
|
1.8
|
2、 添加水平為0.2mg/kg牛奶基質(zhì)中乙烯雌酚檢測色譜圖
圖1 添加水平為0.2mg/kg牛奶基質(zhì)中乙烯雌酚檢測色譜圖
八、結(jié)論
SimplyGreen MAX固相萃取柱萃取奶制品中的己烯雌酚，提取回收率高達(dá)90%，重現(xiàn)性好，符合國家標(biāo)準(zhǔn)要求。
