固相萃取的一般步驟可分為活化、上樣、淋洗、干燥、洗脫等五個步驟，但在實際應(yīng)用中，可根據(jù)分析手段對樣品的要求對這五個步驟進行適當(dāng)?shù)卦黾踊驕p少。比如，當(dāng)使用離子交換原理進行樣品萃取時就需要增加調(diào)節(jié)萃取體系pH的步驟。

1.固相萃取柱的預(yù)處理活化：

用適當(dāng)?shù)娜芤簩滔噍腿≈M行預(yù)處理活化，可以展開碳氫鏈，增加和目標分析物作用的表面積，可以除去柱上吸附的對分析有影響的雜質(zhì)，保證良好的萃取再現(xiàn)性，同時注意在上樣前預(yù)處理好的固相柱必須保持濕潤。

2. 固相萃取柱的上樣：

將樣品加于固相萃取柱中，用正壓或負壓使樣品通過柱子，控制好樣品的流速，對于生物樣品，一般控制在1.5 ml/min。對于以離子交換為作用機理的萃取，樣品通過固相萃取柱的速度應(yīng)該適當(dāng)?shù)慕档?，以保證分析物有足夠的時間與SPE柱填料的離子交換功能團發(fā)生充分的作用。

3.固相萃取柱的淋洗：

用適當(dāng)?shù)那逑慈軇┻x擇性地洗掉附著力弱的雜質(zhì)而保留目標分析物于固相萃取柱上。清洗溶劑的選擇取決于zui后的分析手段。

4. 固相萃取柱的干燥：

如最后的清洗溶劑為緩沖溶液或水溶性有機溶劑，而分析手段為反相HPLC，固相柱上的殘留水對分析影響不大。但是，當(dāng)洗脫劑為非水溶性有機溶劑或分析手段又為GC或GC-MS時，固相柱的干燥就顯得特別重要。

5.目標分析物的洗脫：

選擇洗脫溶劑時必須考慮有足夠強度的洗脫劑，要以zui小用量的洗脫劑將盡可能多的目標分析物洗脫下來；同時還要兼顧洗脫劑必須有足夠的選擇性，選擇只將目標分析物洗脫，而吸附力強的雜質(zhì)保留在柱上。

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