食品中喹諾酮檢測的固相萃取方法
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?span>
本研究利用固相萃取法作為樣品的前處理方法，HPLC法作為檢測手段。該方法可簡化樣品的前處理過程，節(jié)省有機(jī)溶劑的使用，操作簡便。
二、實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)物
依諾沙星(CAS：74011-58-8 ),恩諾沙星(CAS：93106-60-6),培氟沙星(CAS：70458-95-6 )，丹諾沙星(CAS：119478-55-6)
三、應(yīng)用范圍
本方法適用于食品中喹諾酮的HPLC檢測及確證。
四、參考標(biāo)準(zhǔn)
推薦性國家標(biāo)準(zhǔn)《GBT 21312-2007 動物源性食品中14種喹諾酮藥物殘留檢測方法》
五、實(shí)驗(yàn)材料
SimplyGreen HLB 固相萃取柱200mg/6mL。
六、實(shí)驗(yàn)方法
1、樣品提取
稱取均質(zhì)試樣5.0ｇ試樣（精確至0.001ｇ）于50mL離心管中，加入20ｍＬEDTA Mellvaine緩沖溶液，1000r/min渦旋混合1min，超聲提取10min，10000r/min離心5min（溫度低于5度），提取三次合并上清液。
2、SPE柱活化
凈化前用6mL甲醇、6mL水活化。
3、上樣和洗脫
將提取液以2mL/min的速度過柱，棄去濾液，用2mL5%甲醇水溶液淋洗，棄去淋洗液，將小柱抽干，再用6mL甲醇洗脫并收集洗脫液。
4、重新溶解
50℃緩慢氮?dú)饬鳁l件下吹至近干，用1mL0.2%甲酸水溶液溶解。1000r/min渦旋混合1min，經(jīng)0.45um有機(jī)濾膜過濾后用于上機(jī)測定。
5、HPLC條件
色譜柱：Welch Ultimate XB-C18 (4.6*250mm)
流動相：A乙腈 B[0.1%甲酸的水溶液] 梯度洗脫
表1 梯度洗脫條件
|
時間/min
|
A/%
|
B/%
|
|
0.00
|
9
|
91
|
|
11
|
9
|
91
|
|
20
|
29
|
71
|
|
25
|
37
|
63
|
|
26
|
100
|
0
|
|
30
|
100
|
0
|
|
31
|
9
|
91
|
|
36
|
9
|
91
|
流速：1mL/min
柱溫：室溫
進(jìn)樣體積:20μl
七、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
1、6ppb牛奶基質(zhì)中喹諾酮的添加回收結(jié)果
表2
6ppb牛奶基質(zhì)中喹諾酮的添加回收結(jié)果
|
名稱
|
回收率（%）
|
|
依諾沙星
|
92.8%
|
|
丹諾沙星
|
82.4%
|
|
培氟沙星
|
93.8%
|
|
恩諾沙星
|
81.2%
|
2、 空白樣品添加喹諾酮?dú)埩粑锷V圖
